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实验干货 | 动物细胞或组织的蛋白质抽提步骤
246 人阅读发布时间：2021-09-07 16:43
1、从贴壁细胞培养瓶中小心倾去培养液。
2、预冷的 PBS 清洗贴壁的细胞 2 次，小心倾去 PBS。
3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液）。
4、细胞瓶中加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂；5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂），轻轻摇动 5 分钟。
5、用一预冷的橡胶和塑料细胞刮将培养瓶壁上贴壁细胞刮下来，转移细胞悬浮液到离心管中，冰浴下摇动 15 分钟进行裂解。
6、裂解液于预冷的离心机中 14，000xg 离心 15 分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
1、2500xg 离心 10 分钟沉淀悬浮的细胞，弃去上清液
2、预冷的 PBS 悬浮沉淀细胞，2500xg 离心 10 分钟沉淀细胞，去上清。
3、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF 和 5 μl 磷酸酶混合液）。
4、加入含抑制剂的预冷蛋白质抽提试剂（107 个细胞中加入 1ml 抽提试剂；5×106 个细胞中加入 0.5ml 抽提试剂）。
5、轻轻摇动混和 15 分钟进行裂解。
6、裂解液于预冷的离心机中 14，000xg 离心 15 分钟。弃去沉淀，上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。
1、组织称重，切小块放入管中。
2、配置含抑制剂的蛋白质抽提试剂（1ml 抽提试剂中加入 5 μl 蛋白酶抑制剂混合液，5 μl PMSF 和 5ul 磷酸酶混合液）。
3、加入预冷的含抑制剂的蛋白质抽提试剂（250mg 组织中加入 1ml 抽提试剂）。
4、用匀浆器每次 30 秒低速匀浆，每次匀浆间隔冰浴 1 分钟，至组织完全裂解。
5、裂解液于预冷的离心机中 14，000xg 离心 15 分钟。上清液立刻转移入新的离心管中保存待用。