【五分钟讲实验】CCK-8细胞增殖率如何计算？

1.  培养细胞

将待测细胞按照适当的培养条件（如温度、湿度、CO2浓度等）培养至合适的生长状态。

2. 细胞处理

根据实验要求，可以给细胞添加药物、刺激因子等，或者进行细胞移植等操作，以观察对细胞增殖的影响。根据实验设计，将细胞分为不同处理组和对照组。给予不同处理，如药物处理、基因干扰等。留出一组作为未处理对照组。

3. CCK-8试剂处理

从每个孔中移除培养基，可以通过吸液或洗涤的方式进行。

按照CCK-8试剂盒说明书的指导，在每个孔中加入适量的CCK-8试剂。

4. 显色反应

CCK-8试剂可在细胞内被代谢成橙色产物，其光密度与细胞数量成正比。将培养皿放入分光光度计中进行测量，检测CCK-8试剂的吸收值，即可得到细胞增殖率。

5. 孵育

将板放回细胞培养箱中，在适当的温度和时间下进行孵育。通常在37°C的恒温箱中孵育1-4小时。

6. 吸光度检测

使用吸光度计或微板阅读器，在CCK-8试剂盒指定的检测波长下测量每个孔的吸光度值。常见的波长为450 nm。

7. 数据分析

将实验中不同组的CCK-8试剂吸收值进行比较，得出细胞增殖率。一般来说，增殖率计算公式为：

细胞增殖率 = (实验组吸收值 - 空白对照吸收值) / (对照组吸收值 - 空白对照吸收值) × 100%

其中，实验组为添加了药物等处理的细胞，对照组为未处理的细胞。空白对照为不含细胞的培养基。

细胞增殖率计算公式的原理是以对照组为基准，通过比较实验组与对照组的吸光度值差异来评估细胞增殖情况。

当细胞增殖率接近100%时，表示实验组与对照组的细胞数量相当;

当细胞增殖率小于100%时，表示实验组的细胞数量较对照组少；

而当细胞增殖率大于100%时，表示实验组的细胞数量较对照组多。

8. 数据分析

使用数据处理软件（如Excel）或统计分析软件，将所得的数据进行统计分析和图表绘制，以便进一步解读结果并进行比较。

通过比较不同组的细胞增殖率，可以了解不同处理对细胞增殖的影响，并进一步分析细胞的生长特性、药物敏感性等。

需要注意的是，CCK-8试剂的吸收值与细胞密度成正比，而且在不同时间点、不同细胞类型、不同培养条件下，CCK-8试剂的浓度和反应时间也可能会有所不同，因此在进行细胞增殖率测量时，需要根据具体情况进行优化和标准化，以保证结果的可靠性和准确性。

1. 制备细胞悬液，计数。

2. 在96孔板中接种细胞悬液，每孔约100μl，同样的样本可做3个重复。

3. 将培养板放入培养箱中预培养一段时间（37℃, 5%CO2），细胞贴壁需要大约2-4h，如果是悬浮细胞，该步骤可以省去。

4. 每孔各加入10μl CCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比较少，可能会因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀，或者直接配置含10%CCK-8的培养基，以换液的形式加入。另外注意，加样的过程中尽量不要产生气泡。

5. 将培养板放入培养箱中孵育1-4h。因为细胞种类不同，形成的formazan的量也不一样，所以如果显色不够的话，可以延长培养时间，特别是血液细胞形成的formazan很少，需要较长的显色时间（5-6h）。

6. 酶标仪测定450nm处的吸光值（OD）。

7. 若暂时不测定OD值，可以在各孔中加入10μl 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，室温下避光保存，这样可以保证OD值在24h内不发生变化。