【五分钟讲实验】实验动物不同脏器取材方法及病理/电镜组织取材注意事项

实验动物脏器取材注意事项

 

① 若发现肉眼可视病变应认真观察并取准病变部位组织，切勿漏取,全面反映组织病变全貌若有肿瘤的话,包括肿瘤转移部位、切缘等。全面描述病变状况，由表及里地观察病变状况,测重量、记录部位、体重等。

② 若无肉眼可视病变，可代表性取材。

③ 根据实验方法、目的、病变、特殊病变等要求尽量多取材川。选取的组织材料要包括各脏器的主要结构部分。

④ 应避免选取因解剖失误造成的凝血块和坏死组织等。

⑤ 取病理材料时勿压挤(组织变形)刮抹(组织缺损)、冲洗(红细胞和其他细胞吸水肿胀破裂)

⑥ 所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性不宜过厚或过薄。建议选用1.5cmX1.5cmx0.5cm的取材规格。

 

实验动物的各脏器取材细节

 

 

取材后病理定量分析注意事项

 

① 常规HE染色，切片厚度应≤4μm。

② 光镜下首先区分有否特异性病变及范围，然后由脏器一端向另一端进行整体观察和描述。

③ 观察小动物脏器有否肿大、增生，用10倍镜由一端开始计数该脏器包含的10倍镜镜头视野数，或计数整个切片中功能单位数。如脾生发中心、胸腺小叶、肝小叶、肾小球及整个切片中病变灶数量。

④ 大动物脏器疑有肿大、增生时，用40倍镜头计数每一视野中的细胞或功能单位数。心肌、骨骼肌在与长轴平行的切面上计数每一视野直径中的肌纤维数‚肝小叶中肝细胞索数（数40倍镜视野的一半）。根据需要计数10～20个40倍镜视野。

⑤ 确定病灶大小及积分用40倍镜头进行观察。先将镜头的圆周与观察的病灶边缘相切，再观察该病灶在这一视野中的比例。

⑥ 实验动物肿瘤发生率的计算：动物肿瘤的组织分化常不明显，在长期毒性试验或诱癌实验中出现的肿瘤不论良、恶性均计入肿瘤发生数，并计算肿瘤发生率。

 

实验动物组织电镜取材注意事项及要求

 

电镜生物样品的取材,正确与否决定着实验结果的准确性,电镜要求样品必须忠实地反映其生活时的状态,应尽量避免“死后改变”和人为假象的发生,现将电镜取材注意事项总结如下:

① 取材部位要准确: 器官、部位要准确,如观察肾小球需取肾皮质而不要取到肾髓质。

② 动作迅速: 活体(血供未断)取材,料离体后需在1min内放入固定液(戊二)使组织尽可能保持原来的生活状态。

③ 材料体积要小: 一般不超过1m使组织得到均匀而充分的固定,需要定向包埋的样品(如皮肤肌肉、血管等)应切成1x3mm'的长条。

④ 机械损伤要小: 取材应用锋利、清洁的双面刀片(新刀片应用酒精去除刀锋上的油脂),尽量避免牵拉和挤压。

⑤ 低温: 固定液4保存,取材所需器械应进行预冷,取材过程在冰盒上进行,取好的样品放在含固定液的小瓶中4C保存,尽量降低酶的活性,减少细胞的损伤。

 

上述常用实验动物各脏器取材部位和大小的标准仅供参考，具体的课题需求和对不同脏器的取材要求以自身课题标准和需求为准。

 

参考文献：

刘向云，曹霖，孙祖越，药物毒理学中实验动物脏器取材方法探讨.实验动物与比较医学.1004-8448(2006)01-0045-02.

高青.实验动物病理标本的标准化取材和量化诊断方法.实验动物与比较医学.

 

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